对于新手来说，进行组织培养时维持无菌状态仍然是最困难的挑战。当然，早期训练时的笨拙可随着经验而克服。然而，在一些情况下，甚至很有经验的工作者也会遇到污染的问题。污染有几种可能的途径，包括溶液、玻璃仪器和吸量管灭菌过程的失当、室内空气中的涡流和颗粒（灰尘和孢子）、未能良好额日化的孵育箱和冰箱、不完善的层流洁净台、混入污染的细胞系或活检物以及无菌技术失误等，尤其后者是引起污染的最重要原因。

途径或原因预防技术操作、吸量管吹吸、分发等非无菌表面和仪器设备清洁不立即使用的各个工作区培养物溅出至培养瓶颈或外表面及工作面物品经常用70%乙醇抹擦；不要倾倒液体；分发或转移液体时，应使用吸量管、自动分发器或转移装置。如果倾倒不可避免时；1.平稳的移动；2.倾倒后，废弃培养瓶；3.擦净溢出物接触或拿吸量管位置过低拿吸量管的位置应在刻度之上接触培养瓶颈或螺旋帽内口不要在打开器皿的上方操作从废液烧杯溅出将废弃物倒入烧杯时，使用漏斗，或者更完善的是通过真空泵将废液移入容器中皮肤的脱屑、灰尘颗粒落入培养物或培养瓶中，手或器械位于打开的培养皿或培养瓶上方不要在垂直层流罩或开放工作台的上方操作，也不要在水平层流罩的后部，或在一个打开的培养瓶或培养皿的上面操作工作表面灰尘及溅出物工作前、工作后、工作时，用70%的乙醇擦洗工作台表面。立即擦去溅出物操作者的头发、手、呼吸、衣服从皮肤、头发或衣服落下的灰尘落在或吹至培养物中仔细洗手或带手套，穿无绵绒的实验室外套，具有松紧口的袖口以及覆盖其上的手套谈话及咳嗽、打喷嚏时所产生的气雾尽量少说话，谈话时尽量将脸远离工作面。感冒或咽喉感染时不要工作，或带上口罩。长发结扎在背后，或带帽。实验室外套应不同于一般实验室及动物房中的外套。材料和试剂溶液未灭菌的试剂及培养液在使用试剂及培养液前，应用滤膜过滤或高压灭菌肮脏的贮存条件清洁贮存区并定期消毒不适当灭菌程序用记录温度计或者无菌指示监测高压灭菌器的运转状况，在使用滤膜后，用起泡点或微生物测定法检查滤膜的完整性。在灭菌较差的供应商贮存物有灰尘或孢子用箔片包裹螺旋帽。玻璃瓶在放入超净台之前用70%乙醇抹擦。从架子后面替换贮存液。任何物品未封口前，不要放置超过24小时。无效灭菌（例如消毒锅内物品放置过于拥挤或者瓶子密封，阻止气流进入)在整个消毒期间监测所需温度；在高压灭菌时，保持螺旋帽松弛地置于空瓶上，正确操作烘箱和高压灭菌锅无效灭菌在使用仪器前，用干热消毒法进行消毒；监视烘箱的运作与未消毒表面或其他未消毒材料接触再次消毒仪器（70%乙醇擦拭，或洪灼然后冷却仪器设备）。不要抓拿要插入培养皿中的仪器或移液管的任何部分。正在使用的培养瓶和培养液瓶来自培养箱或冰箱的灰尘和袍子采用螺旋帽代替塞子；放入超净台内之前擦抹瓶子，讲培养板和盘包装好。贮存和培养条件不良在贮存或培养时，用铝箔覆盖瓶帽和瓶颈；在使用前，用70%乙醇擦抹培养瓶；定期清洁贮存间和培养箱。瓶帽下积有培养液并泼散到瓶外如看到瓶颈外面有泼散物，丢弃瓶子。操作时不要倾倒培养液，而应用吸管吸取。仪器设备和装置室内空气通风、气流、涡轮、灰尘、烟雾清洁过滤空气的滤片；减少走动和无关的活动；定期擦抹地板和工作面。层流超净台多孔滤器定期检查过滤器是否缺损更换滤器检查通过滤器的压力滴珠溅出物、特别是在裂缝处及工作面清洁工作面周围区域及下面，让乙醇注入裂缝中干燥培养箱从溅出物上生长出霉菌和细菌用沾有70%的乙醇清洁潮湿的二氧化碳培养箱在潮湿情况下，箱壁及隔板生长霉菌和细菌先用去污剂，再用70%乙醇清洁鼓风循环携带有袍子等用密封盖子（但不要封死盖子）将打开的培养皿密封在塑料盒内。讲它们打开前，用70%乙醇抹擦。在使空气湿润的水中，加入啥霉菌剂或杀菌剂（但首要检查是否有毒性）其他装置CO2钢瓶及泵等上的灰尘在带入前，用70%乙醇抹擦。来自于动物房、木制家具或工作台的、孵箱内的小鼠身上的螨虫、昆虫和其他传染物螨虫等侵入无菌包装物密封所有的灭菌包装物、尽可能不要使用木制家具而用完整一体化塑料或不锈钢的工作台面。生物材料的传入组织标本其来源已感染或在解刨时感染不要将动物带入组织培养实验室将抗生素加入解刨液中将所有潜在可能感染的较大组织块浸泡于70%乙醇中30S外来的细胞系在来源处或在运送时污染单独处理这些细胞系，最好在所有其他灭菌工作完成后再进行检疫。以含2%酚类杀菌剂的70%乙醇擦洗工作台和罩子，到第二天早晨可再使用它。用未加抗生素的培养基培养生长2周，监测其污染情况（在首次传代培养物中加抗生素，并保持双份培养）。肉眼观察有无污染，再用相差显微镜及Hoechst染色观察支原体。在首次代培养物之前，利用指示细胞进行筛选。本文来源CellMax胎牛血清，版权归原作者所有，授权转载请联系原作者。文章只为学术新闻信息的传播，不代表本

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